Dowody na to, że ludzkie miocyty sercowe dzielą się po zawale mięśnia sercowego ad

Mechaniczne przeciążenie w chorobie, która trwa kilka lat, może progresywnie wyczerpać zdolności replikacyjne miocytów. Komórki nie mogą się dzielić w nieskończoność. W przeciwieństwie do tego, po dużym zawale mięśnia sercowego nagły wzrost zapotrzebowania na wzrost może spowodować, że więcej miocytów powróci do cyklu komórkowego niż podczas przewlekłej niewydolności serca. Aby przetestować tę hipotezę, ustaliliśmy odsetki miocytów rowerowych i wskaźników mitotycznych u pacjentów, którzy zmarli w krótkim czasie po rozległym zawale mięśnia sercowego. Kolarskie miocyty zidentyfikowano przez ekspresję Ki-67 w jądrach. To białko jądrowe jest związane tylko z podziałem komórek.7,8 Chociaż funkcja Ki-67 nie jest jasna, wydaje się, że promuje proliferację komórek poprzez zakłócanie wiązania p53 z DNA. 9 Aby uniknąć błędów w identyfikacji miocytów, ocenialiśmy podział mitotyczny jąder miocytów za pomocą mikroskopii konfokalnej cytoplazmy komórkowej oznaczonej immunologicznie.1,3 Miara regeneracji komórek została określona oddzielnie na obszarach graniczących i odległych od zawałów. Aby zbadać charakterystykę podziału komórki in vivo, szukaliśmy tworzenia wrzeciona mitotycznego przez mikrotubule10 i pierścienia kurczliwego przez akumulację aktyny, 11 oraz kariokinezę i cytokinezy. Metody
Pacjenci
Trzynaście serc uzyskano od pacjentów, którzy zmarli 4 do 12 dni po zawale mięśnia sercowego. Było siedmiu mężczyzn i sześć kobiet, ze średnim (. SD) wiekiem 64 . 15 lat. Jak wcześniej opisano, 12 otrzymaliśmy 10 serc kontrolnych podczas autopsji od pięciu mężczyzn i pięciu kobiet, ze średnim wiekiem 61 . 20 lat, którzy zmarli z przyczyn innych niż choroba sercowo-naczyniowa. Wielkość zawału została określona przez pomiar obszaru rażąco wykrywanego martwego mięśnia sercowego w obrębie wolnej ściany lewej komory; wyrażono to jako ułamek całkowitej powierzchni13. Resztę wolnej ściany lewej komory podzielono na trzy równe części, które zdefiniowano jako strefę graniczną, region pośredni i daleki mięsień sercowy. Ponieważ średni rozmiar zawału wynosił 35 procent, średnia wielkość każdego obszaru żywej tkanki wynosiła prawie 20 procent wolnej ściany lewej komory. Próbki pobierano tylko ze strefy granicznej i odległego mięśnia sercowego. Badano próbki tkanek z porównywalnych obszarów niewprowadzonych serc kontrolnych.
Mikroskopia konfokalna i analiza immunocytochemiczna
Próbki utrwalono w 10 procentach formaliny buforowanej fosforanem i zatopiono w parafinie. Skrawki histologiczne wybarwiono jodkiem propidyny (10 ug na mililitr) i przeciwciałem przeciwko aktynie .-sarcomerycznej (klon 5C5, Sigma), rozcieńczonym 1:20 w soli fizjologicznej buforowanej fosforanem. W celu identyfikacji wrzecion mitotycznych próbki eksponowano na mysie monoklonalne przeciwciało przeciwmitubulinowe (Zymed). Jako przeciwciało drugorzędowe zastosowano przeciwciało IgG sprzężone z izotiocyjanianem fluoresceiny. W celu wykrycia Ki-67 próbki eksponowano przez jedną godzinę w 37 ° C na mysie przeciwciało monoklonalne przeciwko Ki-67 (klon MIB-1, Diagnostic Biosystems), rozcieńczono 1:40 w soli fizjologicznej buforowanej fosforanem. 7 Fluoresceina skoniugowane z izotiocyjanianem antygenu IgG ponownie zastosowano jako przeciwciało drugorzędowe
[hasła pokrewne: bromizm, katalepsja, jak działa aparat ortodontyczny ]
[przypisy: promazyna, lek przeciwmalaryczny, suchoty objawy ]