Infekcja śmiertelna powieścią, niezidentyfikowane Mycobacterium u mężczyzny z zespołem nabytego niedoboru odporności cd

Komórki oczyszczono i zliczono w hemocytometrze. Na każdą studzienkę 96-studzienkowych płytek hodowlanych (Costar, Cambridge, Mass.), 105 komórek nawarstwiono i pozostawiono do przylgnięcia na trzy godziny. Dodano pożywki hodowlane zawierające pręty o wysokiej kwasowości (1 x 106 w 100 .l). Kontrolne monowarstwy otrzymywały materiał poddany obróbce cieplnej (100 ° C przez 30 minut), same makrofagi lub same pręty o wysokiej kwasowości. Po 24 godzinach dalszej inkubacji, pałeczki, które nie zostały poddane fagocytozie, usunięto przez dwukrotne przemycie zrównoważonym roztworem soli Hanksa i dodano 37 kBq (1 uCi) metylo- [3H] tymidyny (aktywność właściwa, 1,554 x 1012 Bq). [42 Ci] na milimol 22). Pożywkę i znacznik promieniotwórczy wymieniano co trzy do czterech dni.
Po 14 dniach inkubacji pożywki hodowlane poddano lizie z 1% dodecylosiarczanu sodu i potraktowano kwasem trichlorooctowym (stężenie końcowe, 5%) przez 30 minut. Osady zebrano na filtrach z włókna szklanego, przemyto i osuszono. Mierzono radioaktywność zatrzymaną w filtrach.
Wyniki
Rysunek 1. Rysunek 1. Badania histologiczne. Panel A pokazuje próbkę z dwunastnicy pacjenta, zbadaną podczas autopsji (× 0,5), a panel B śledziony nagiej myszy. Sześćdziesiąt dni wcześniej zwierzę zaszczepiono 106 prętami odpornymi na kwasy ze śledziony pacjenta (× 440). W obydwu panelach purpurowe obszary to makrofagi wypełnione prętami o wysokiej kwasowości (barwa Ziehl-Neelsena).
Figura 2. Figura 2. Grupa bakterii w próbce wątroby od pacjenta (× 62.700). Laseczki są w stanie zaawansowanej degradacji, na co wskazuje brak rybosomów, złamane i symetryczne błony oraz zdeformowane ściany komórkowe. Ściana komórkowa zawiera trójwarstwową strukturę typową dla prątków (strzałki).
Próbka z biopsji dwunastnicy uzyskana od pacjenta na 12 miesięcy przed śmiercią wykazała infiltrację tkanki łącznej podśluzówkowej za pomocą prętów kwasoodpornych. Podczas autopsji jamę otrzewnową pokryto dyfuzyjnie białymi guzkami o średnicy od 3 do 5 cm. Węzły chłonne, wątroba i śledziona zostały masowo powiększone. Mikroskopowo, kwasowo-szybkie zabarwienie ujawniło ogromne ilości prętów odpornych na działanie kwasów w cytoplazmie histiocytów wszystkich tych tkanek, a czasami wolnych między komórkami (ryc. 1A). Barwienie Grocotta w przypadku grzybów i barwienia Grama na bakterie były negatywne. Nie było żadnych dowodów na chłoniaka, mięsaka Kaposiego ani na chorobę włączającą cytomegalowirusa. Pod mikroskopem elektronowym widoczne były obfite bakterie (ryc. 2). Ultrastruktura ściany komórkowej widoczna w resztkach prącia była typowa dla prątków.23
Nie powiodły się wszystkie próby hodowania przypuszczalnego prątka na podłożach stałych (patrz Metody). W hodowlach płynnych (Middlebrook 13A) zawierających palmitynian [14C] (Bactec) słaby sygnał został wykryty kilka razy po około trzech tygodniach, jak ostatnio opisano dla M. leprae. 24 Próbowano subkultury przy użyciu wszystkich metod opisanych powyżej, ale bezskutecznie.
Figura 3. Figura 3. Włączenie [3H] tymidyny przez makrofagi. Pasek po lewej stronie przedstawia wyniki dla makrofagów hodowanych za pomocą 106 prętów kwasowo-szybkich z tkanki śledzionowej pacjenta; środkowy pasek, wyniki dla makrofagów hodowanych z zabitymi ciepłem prętami o wysokiej kwasowości; i pasek po prawej stronie, wyniki dla samych makrofagów
[podobne: oberwanie brzucha, ksobne, olejek rycynowy na rzęsy opinie ]