Mutacje keratyny 8 u pacjentów z kryptogenną chorobą wątroby ad 6

Dwóch pacjentów z mutacją G61C miało cechy autoimmunologiczne. Jeden pacjent z historią nadużywania wielu substancji miał mieszane nacieki limfocytów i komórek plazmatycznych w jej próbce z biopsji wątroby i eksplantowanej tkance, chociaż testy serologiczne na autoimmunizację były negatywne i nie miała odpowiedzi na leczenie prednizonem i azatiopryną. Jeden pacjent miał podwyższone przeciwciała przeciwjądrowe (miano, 1: 640) i przeciwciała przeciwko mięśniom gładkim (miano, 1:20), ale jej próbki do biopsji nie zawierały komórek plazmatycznych. Jeden pacjent z mutacją Y53H miał ciała Mallory ego, ale nie miał historii nadużywania alkoholu. Żaden z pacjentów z mutacją w genie keratyny 8 nie miał w przeszłości cukrzycy ani hiperlipidemii. Ekspresja zmutowanego białka keratyny 8
Przeanalizowaliśmy wytrącenia keratyny 8 i keratyny 18 (Figura 1B), które otrzymano z próbek dwóch normalnych wątrób i trzech eksplantowanych wątrób z mutacją G61C przez immunoblotting dla keratyny 8 w warunkach redukujących i nieredukujących (Figura 1C). To podejście wykorzystuje nieobecność reszt cysteiny w keratynie 8 i keratynie 18, które potencjalnie mogłyby kowalencyjnie łączyć białka, które w przeciwnym razie nie byłyby połączone. Trzy próbki z mutacją G61C, ale nie z normalnych próbek (lub próbek wątroby z marskością wątroby [dane nie pokazane]) miały usieciowane geny 8 keratyny o w przybliżeniu 100 kd, które pojawiły się tylko w warunkach nieredukujących (Figura 1C). Gatunek 100-kd najprawdopodobniej odpowiadał dwóm cząsteczkom keratyny 8 (kowalencyjnie połączonych przez dwie zmutowane reszty cysteiny), co jest zgodne z normalnym tetramerycznym, niekowalencyjnym wiązaniem keratyn (dwie cząsteczki keratyny 8 i dwie cząsteczki keratyny) jako heteropolimery24 i z brakiem reaktywności gatunku 100 kd z przeciwciałami specyficznymi dla keratyny 18 (dane nie pokazane). Chociaż związku między keratyną 8 a mutacją G61C i innymi cząsteczkami nie można wykluczyć, nasze odkrycia wskazują, że zmutowane białko G61C ulegało ekspresji w tych trzech próbkach wątroby.
Obecność zmutowanego białka Y53H została potwierdzona przez ocenę zmiany od kwaśnej tyrozyny (punkt izoelektryczny, 5,63) do zasadowego histydyny (punkt izoelektryczny, 7,64) na dwuwymiarowej elektroforezie żelowej. Keratyna 8 w normalnej wątrobie składa się z dwóch naładowanych izoform: jednej, która jest niefosforylowana, a druga fosforylowana.18,21 Natomiast keratyna 8 wyizolowana z eksplantowanej wątroby pacjenta heterozygotycznego pod względem mutacji Y53H rozdzieliła się na cztery izoformy – dwie normalne izoformy i dwie zmutowane izoformy Y53H (Figura 1D). Zgodnie z przewidywaniami, zmutowana niefosforylowana izoforma była bardziej zasadowa niż normalna niefosforylowana izoforma, ze względu na obecność dodatkowego histydyny. Przypisanie normalnych i zmutowanych izoform potwierdzono analizą mieszaniny próbek normalnych i zmutowanych (Figura 1D).
Mutacje w stresie genów i komórek keratyny 8
Figura 2. Figura 2. Barwienie immunofluorescencyjne komórek NIH 3T3 transfekowanych kofeiną dzikiego typu i zmutowaną 8 konstruktami. Komórki NIH 3T3 transfekowano zarówno keratyną 18 typu dzikiego, jak i konstruktami keratyny 8 typu dzikiego lub zmutowanymi. Po 54 godzinach komórki poddano obróbce w celu barwienia immunofluorescencyjnego za pomocą przeciwciała przeciw keratynie 8 M20
[więcej w: hiperostoza czołowa, jak działa aparat ortodontyczny, majaczenie drżenne ]
[hasła pokrewne: odma opłucnowa rehabilitacja, hiperostoza czołowa, hiperostoza czołowa objawy ]