Nonwirusowy transfer genu VIII kodującego czynnik krzepnięcia genu u pacjentów z ciężką hemofilią czesc 4

Komórki z klonu, który był przeznaczony do wszczepienia, zebrano dzień przed implantacją, intensywnie przemyto i wprowadzono do strzykawki. Następnie podano 100 milionów lub 400 milionów sklonowanych komórek. Podczas przygotowywania kultury fibroblastów przetwarzano aseptycznie w warunkach klasy 100. 18 Testy czynnika VIII
Przeprowadzono standardowe jednoetapowe testy aktywności krzepnięcia czynnika VIII i testy inhibitorów Bethesda oparte na pomiarze czasu aktywowanej częściowej tromboplastyny (zautomatyzowany odczynnik APTT, Organon Teknika) na instrumencie MDA przy użyciu standardowej krzywej przygotowanej dla normalnego człowieka połączony standard kalibracji osocza (Precision Biologic), który został skalibrowany zgodnie ze standardem Światowej Organizacji Zdrowia. Nieprawidłowe kontrole (Dade i Behring) i normalne kontrole (Precision Biologic), oba pochodzące z ludzkiego osocza, zostały użyte do walidacji testów. Próbki surowicy od pacjentów analizowano pod kątem przeciwciał przeciwko czynnikowi VIII przy użyciu dwóch swoistych testów immunoabsorpcji enzymatycznej. Pełnej długości ludzki czynnik VIII pochodzący z komórek jajnika chomika chińskiego (Recombinate, Hyland-Baxter) lub ludzkiego czynnika VIII pochodzącego z ludzkiego osocza (Hemofil-M, Hyland-Baxter) został użyty do pokrycia studzienek płytek mikrotitracyjnych przed dodaniem serum pacjenta. Test immunoenzymatyczny został opracowany z kozim przeciwciałem skoniugowanym z peroksydazą chrzanową. Test został zwalidowany za pomocą normalnego ludzkiego osocza i nieprawidłowego ludzkiego osocza zawierającego różne ilości przeciwciał czynnika VIII (George King Bio-Medical). Wszystkie specjalistyczne badania krzepliwości krwi przeprowadzono w Esoterix Coagulation Laboratories przy użyciu zamrożonych próbek osocza lub surowicy pobranych od pacjentów podczas wszystkich zaplanowanych wizyt; jednak w 9 miesiącu testowano tylko aktywność czynnika VIII i tylko u pacjentów 5 i 6.
Wyniki
Charakterystyka pacjentów i wytwarzanie czynnika VIII przez wszczepione fibroblasty
Tabela 1. Tabela 1. Charakterystyka Szóstki Pacjentów. Tabela 2. Tabela 2. Całkowita produkcja czynnika VIII przez wszczepione autologiczne fibroblasty. Tabela przedstawia charakterystykę sześciu pacjentów. Jak pokazano w Tabeli 2, Pacjenci 1, 2 i 3 otrzymali po 100 milionów komórek, a Pacjenci 4, 5 i 6 otrzymali 400 milionów komórek. Pokazano również całkowitą produkcję czynnika VIII każdego z klonów, które zostały wszczepione.
Bezpieczeństwo
Biopsja skóry była dobrze tolerowana przez wszystkich sześciu pacjentów i nie było żadnych epizodów krwawienia ani powikłań zakaźnych. Laparoskopowe wszczepienie fibroblastów było również dobrze tolerowane. Średni czas trwania operacji (. SD) wynosił 65 . 7 minut. Średni czas potrzebny do wstrzyknięcia fibroblastów wynosił 15 . 3 minuty. Nie było żadnych powikłań związanych ze znieczuleniem. Po zabiegu wszyscy chorzy mieli niewielki dyskomfort w jamie brzusznej w miejscu nacięcia. Innymi zdarzeniami niepożądanymi w okresie pooperacyjnym były ból związany z barkami u pięciu pacjentów, wycięcia w jamie brzusznej u dwóch osób oraz gorączka pooperacyjna o niskim stopniu złośliwości (która nie wymagała leczenia) w jednym. Nie było długotrwałych powikłań związanych z operacją.
Wszystkie testy inhibitorów Bethesda i testy immunoenzymatycznych przeciwciał przeciw czynnikowi VIII były negatywne
[więcej w: odma opłucnowa rehabilitacja, zatrucie atropiną, aparat ortodontyczny przed i po ]
[więcej w: promazyna, lek przeciwmalaryczny, suchoty objawy ]